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血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳

　　【实验目的】

理解电泳法分离血清蛋白质的原理，掌握醋酸纤维薄膜电泳法的操作方法。

　　【实验原理】

在电场中，蛋白质阴离子向正极移动，阳离子向负极移动，移动的速度受蛋白质的电荷数量的多少、分子量的大小、形状等因素影响。带电荷多的、分子量小的、球形的分子移动速度就快，反之就慢。

血清蛋白质的等电点大都在pH7以下，因此在pH8.6的缓冲溶液中都带负电荷，在电场中向阳极移动。由于不同蛋白质的电荷数、分子量的大小、形状各不相同，因此在电场中移动的速度不同。经过一段时间的电泳，就可以将血清中的蛋白质分离开来。

被分离的蛋白质是无色的，用氨基黑10B处理薄膜，可以显示出各种蛋白质电泳后在薄膜上的位置及大致含量。从正极起依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白5条区带（实验图2-3）。

　　【实验器材】

电泳仪、醋酸纤维薄膜（2cm×8cm）、滤纸、培养皿、剪刀、镊子、加样器（或盖玻片）、直尺、玻璃板、试管、试管架、吸量管等。

　　【实验试剂】

　　1．巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.06）  称取巴比妥钠12.76g，巴比妥1.66g。加蒸馏水500ml。加热溶解，冷却至室温后再加蒸馏水到1000ml。

　　2．氨基黑10B染液  称取氨基黑10B0.5g，加入冰醋酸10ml、甲醇50ml及蒸馏水40ml，混匀，在具塞试剂瓶内储存。

　　3．漂洗液  取95%乙醇45ml，冰醋酸5ml，加蒸馏水至50ml，混匀备用。

　　【操作步骤】

    1．准备  将一定量的缓冲液倒入两侧的电泳槽，两侧的液面要呈水平状态。将滤纸叠成4层，剪成1.5cm～2cm宽，3cm左右长的矩形条贴在电泳槽的两侧支架上，上端搭在支架前沿上，下端伸入到电泳槽底部，浸到缓冲液中，形成滤纸桥（实验图1-1）。

实验图1-1  电泳槽装置示意图

　　在醋酸纤维薄膜（2cm×8cm）无光泽面上的一端约1.5cm处，用铅笔轻划一条直线（点样线），并将薄膜编号。然后将薄膜浸入巴比妥缓冲溶液，待浸透后（时间大约20分钟，薄膜无白斑），取出，夹在洁净滤纸中间，轻轻吸去薄膜表面的缓冲液。

    2．点样  取少量血清于玻璃板上，用加样器取血清2μl～3μl均匀加在薄膜的点样线上（或用盖玻片轻蘸少许血清，点压在点样线上），待血清渗入膜内后移开点样器。点样线上出现一条粗细均匀且有一定宽度的淡黄色直线（实验图1-2）。

实验图1-2  点样位置示意图

    3．电泳  将薄膜的加样面朝下，加样端置于负极一端，平整地架在两侧电泳槽支架的滤纸桥上，平衡5分钟。然后接通电泳仪电源，调节电压为100V～160V，电流0.4A～0.6A/cm膜宽。通电40～50分钟，待电泳区带展开约3.5cm便可以关掉电源。

　　4．染色  将电泳后的薄膜于染色液中浸泡2分钟，取出后再依次浸入2～3个盛有漂洗液的培养皿中反复漂洗，每次漂洗10分钟左右，直到背景颜色漂净。薄膜出现5条蛋白色带，从正极依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白（实验图1-3）。

实验图1-3  正常人血清蛋白电泳图谱

【临床意义】

肝硬化时，白蛋白显著降低，而γ-球蛋白显著升高。肾病综合症时，白蛋白显著降低，而α2、β球蛋白升高，因此在临床可以根据血清中不同蛋白质的含量情况对疾病做出辅助诊断。

本文到此讲解完毕了，希望对大家有帮助。