大家好，我是小根根，我来为大家解答以上问题。硫酸铵沉淀法名词解释，硫酸铵沉淀法的原理及步骤很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

1、抗体的纯化 ( 硫酸铵沉淀法） 一， 基本原理 硫酸铵沉淀法可e68a84e8a2ad3231313335323631343130323136353331333332616362用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。

2、用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。

3、高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。

4、各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。

5、这种方法称之为盐析。

6、盐浓度通常用饱和度来表示。

7、硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。

8、 二， 试剂及仪器 1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等 2. 硫酸铵（ NH 4 ） SO 4 3. 饱和硫酸铵溶液（ SAS ） 4. 蒸馏水 5. PBS( 含 0.2g /L 叠氮钠 ) 6. 透析袋 7. 超速离心机 8. pH 计 9. 磁力搅拌器 三， 操作步骤 以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。

9、各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸 铵的饱和度也不完全相同。

10、通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% 。

11、 （一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ） 1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升 蒸馏水中。

12、用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。

13、此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）. 2.其它不同饱和度铵溶液的配制 （二）沉淀 1.样品（如腹水） 20 000 ′ g 离心 30 min ，除去细胞碎片； 2.保留上清液并测量体积； 3.边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中，终浓度为 1 ： 1 （ 4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜（ 4 ° C ），使蛋白质充分沉淀。

14、 （三）透析 1.蛋白质溶液 10 000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ）。

15、弃上清保留沉淀； 2.将沉淀溶于少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 叠氮钠中。

16、沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析 24-48 小时（ 4 ° C ），每隔 3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨； 3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。

17、 四，应用提示 （一） 先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。

18、 1.边搅拌边慢慢加 SAS 到样品溶液中，使浓度为 0.5:1 (v/v) ； 2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时 或过夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ），保留上清液；上清液再加 SAS 到 0.5:1(v/v) ，再次离心得到沉淀。

19、将沉淀溶于 PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 (v/v) ，再次离心得到沉淀。

20、将沉淀溶于 PBS ，同前透析，除去硫酸氨； 5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效 （二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表 1 ）；硫酸氨沉淀法与层析 技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

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